原位雜交技術方法大致可分為:1.雜交前準備,包括固定、取材、玻片和組織的處理,如何增強核酸探針的穿透性、減低背景染色等;2.雜交;3.雜交后處理;4.顯示(visualization):包括性自顯影和非性標記的顯色。固定原位雜交組織化學技術在固定劑的應用和選擇上應兼顧到三個方面:保持細胞結構,限度地保持細胞內DNA或RNA的水平;使探針易于進入細胞或組織。DNA是比較穩定的,mRNA是相對穩定的但易為酶合成和降解。RNA卻絕然不同,非常容易被降解。因此,對于DNA的定位來說,固定劑的種類和濃度并不十分重要。相反,在RNA的定位上,如果要使RNA的降解減少到低限度,那么,不僅固定劑的種類濃度和固定的時間十分重要,而且取材后應盡快予以冷凍或固定。
原位雜交技術在許多領域都有應用,以下是其中幾個具體應用:
細胞生物學和發育生物學:在細胞生物學和發育生物學領域,原位雜交技術常被用于研究基因的表達和定位。例如,通過標記特定基因的探針,可以在細胞或組織中檢測特定基因序列的存在和分布,進而了解基因在細胞分化、發育和功能中的作用。
基因組學和遺傳學研究:原位雜交技術也可用于基因組學和遺傳學研究。例如,通過標記多個基因探針,可以檢測基因組中的多個基因序列,從而進行基因定位、基因表達譜分析、基因突變檢測等研究。
病毒學和病原微生物研究:在病毒學和病原微生物學領域,原位雜交技術常被用于檢測和定位病毒、細菌等病原微生物。例如,通過標記特異性或核酸探針,可以檢測組織中病原微生物的存在、情況以及分布特征,從而為疾病的預防、診斷和提供依據。
總之,原位雜交技術在生物學、醫學、基因組學、遺傳學、病毒學和病原微生物學等領域都有廣泛的應用價值,為人類認識生命現象、探究疾病機制和提供了有力的技術支持。
植物原位雜交的應用包括:
研究基因表達:通過觀察熒光信號的位置和數量,可以確定目標基因在植物組織中的表達模式和位置。
染色體定位:將目標基因與染色體中的特定位置進行比較,熒光原位雜交,可以確定目標基因在染色體中的位置和分布。
基因:通過原位雜交技術,可以確定目標基因的序列和位置,為基因提供重要的參考信息。
檢測物種或品種特異性:通過原位雜交技術可以檢測出不同物種或品種之間基因表達的差異,從而為物種或品種特異性研究提供依據。
遺傳育種:通過原位雜交技術可以檢測出不同品種之間基因表達的差異,從而為遺傳育種提供重要的參考信息。
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