原位雜交技術是在一定的溫度和離子濃度下，使具有特異序列的單鏈探針通過堿基互補規則與組織細胞內待測的核酸復性結合而使得組織細胞中的特異性核酸得到定位，并通過探針上所標記的檢測系統將其在核酸的原有位置上顯示出來。經特定標記的核苷酸鏈為探針，熒光原位雜交，可與組織切片、細胞或染色體標本中的待檢DNA片段或mRNA進行雜交，然后顯示標記物，從而分析待檢核酸的分布和含量。利用此項技術可研究各種基因在染色體上的定位，編碼某種蛋白質的mRNA在胞質中的表達。



 
原位雜交技術方法大致可分為：1.雜交前準備，包括固定、取材、玻片和組織的處理，如何增強核酸探針的穿透性、減低背景染色等；2.雜交；3.雜交后處理；4.顯示（visualization）：包括性自顯影和非性標記的顯色。固定原位雜交組織化學技術在固定劑的應用和選擇上應兼顧到三個方面：保持細胞結構，限度地保持細胞內DNA或RNA的水平；使探針易于進入細胞或組織。DNA是比較穩定的，mRNA是相對穩定的但易為酶合成和降解。RNA卻絕然不同，非常容易被降解。因此，對于DNA的定位來說，固定劑的種類和濃度并不十分重要。相反，在RNA的定位上，如果要使RNA的降解減少到低限度，那么，不僅固定劑的種類濃度和固定的時間十分重要，而且取材后應盡快予以冷凍或固定。




菌落的裂解及DNA結合于纖維素濾膜
（1） 在一張保鮮膜上制作一個裝有0.5mol/L NaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，將濾膜放到小洼上，展平保鮮膜，使濾膜均勻濕潤，讓濾膜留于原處2-3分鐘。
（2） 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜，用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復步驟（1）。
（3） 吸干濾膜，將濾膜轉移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4）的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜，再重復一次該步驟。
（4） 吸干濾膜，把它轉移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4）的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜，轉移到一張干的濾紙上，置于室溫20-30分鐘，使濾膜干燥。
（5） 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間，在真空烤箱中于80℃干烤2小時，固定DNA。
（6） 將固定在膜上的DNA與32 P標記的RNA進行雜交。



 
 
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