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液相色譜法概述
液相色譜法自20世紀60年代問世以來,由于使用了高壓輸液泵、全多孔微粒填充柱和高靈敏度檢測器,實現(xiàn)了對樣品的高速、和高靈敏度的分離測定。液相色譜由于吸取了經(jīng)典液相色譜的研制經(jīng)驗,并引入微處理機技術(shù),極大的提高了儀器的自動化水平和分析精度。現(xiàn)在用微處理機控制的液相色譜儀,其自動化程度很高,既能控
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液相色譜法概述
液相色譜法自20世紀60年代問世以來,由于使用了高壓輸液泵、全多孔微粒填充柱和高靈敏度檢測器,實現(xiàn)了對樣品的高速、和高靈敏度的分離測定。液相色譜由于吸取了經(jīng)典液相色譜的研制經(jīng)驗,并引入微處理機技術(shù),極大的提高了儀器的自動化水平和分析精度。現(xiàn)在用微處理機控制的液相色譜儀,其自動化程度很高,既能控制儀器的操作參數(shù)(如溶劑梯度洗脫、流動相流量、柱溫、自動進樣、洗脫液收集、檢測器功能等),又能對獲得的色譜圖進行收縮、放大、疊加,以及對保留數(shù)據(jù)和峰高、峰面積進行處理等,為色譜分析工作者提供了、功能的分析工具。
液相色譜
HPLC對流動相的一般要求
流動相就比如人體的血液,其質(zhì)量直接影響到整個系統(tǒng)的正常運行與否。
應(yīng)該使用HPLC級的溶劑,不能互相混溶的溶劑不可以直接切換!一般在水相和與其不混溶的溶劑切換時,使用異作為過渡溶劑。
注意溶劑的截止波長。截止波長是指該溶劑可以在紫外檢測器中使用的低波長,該波長后,溶劑會有很強的紫外吸收,從而影響極限的穩(wěn)定性、干擾對所分析物質(zhì)的檢測。
HPLC所使用的水必須是新鮮的和經(jīng)過0.45μm濾膜過濾過的。建議每天更換新鮮的水。長期不用時,必須把使用水的管路用置換,防止長霉。
儀器使用完后要采用適當?shù)娜軇_洗等方法維護色譜柱和系統(tǒng)。如果使用了緩沖鹽一定先將鹽要沖洗干凈。
儀器長期不用時,不建議使用純封存。因為有生成聚合物的趨勢。建議使用、/水或/水封存。
當有流路堵塞時,可以嘗試將之反接后沖洗。污染的溶劑或溶劑瓶里的藻類生長將會縮短溶劑過濾器的使用壽命,并且影響泵和系統(tǒng)的的性能。這在水溶劑或磷酸鹽緩沖液(pH 4 至7) 中尤其如此。
自動進樣器
樣品在進樣前必須經(jīng)過適當?shù)念A(yù)先處理,需要經(jīng)過亞微米濾膜的過濾或者離心,防止樣品中的微小顆粒堵塞管路,好使用流動相作為溶劑配制樣品,所用溶劑應(yīng)該對樣品有較好的溶解性。
針座是喇叭口朝上暴露在空氣中的,有時空氣中的較大灰塵顆粒可能恰好落在針座的流路內(nèi)而引起針座的堵塞。這時候可以嘗試卸下針座,將它接在泵的出口上反沖,一般能解決問題。
如果經(jīng)常使用緩沖溶液,除了泵頭之外,ALS計量泵的柱塞及密封圈,六通閥的轉(zhuǎn)子密封圈和定子密封圈應(yīng)該定期清洗,防止有鹽的顆粒磨損ALS一定要使用Agilent的樣品瓶及瓶蓋;使用不兼容的或者加工精度差的樣品瓶及瓶蓋會引起ALS故障率的增加及性能的降低。
正相液相色譜
柱內(nèi)填充有微小的二氧化硅顆粒和非極性