(1)75% (體積分數(shù))酒精消毒孕鼠,在無菌條件下取出胎鼠,分離并切取脊髓,置于冷的無鈣、鎂的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。
(2)解剖顯微鏡無菌條件下仔細剝離脊膜及血管。
(3)用彈簧剪將脊髓剪成1cm3大小，消化液37℃消化15-20min，每五分鐘振蕩一次；
(4)去掉上清，加入終止液終止消化，吹打10-15次，不能有氣泡，收集上清，剩余組織再消化
動物全自動血液分析
(1)75% (體積分數(shù))酒精消毒孕鼠,在無菌條件下取出胎鼠,分離并切取脊髓,置于冷的無鈣、鎂的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。
(2)解剖顯微鏡無菌條件下仔細剝離脊膜及血管。
(3)用彈簧剪將脊髓剪成1cm3大小，消化液37℃消化15-20min，每五分鐘振蕩一次；
(4)去掉上清，加入終止液終止消化，吹打10-15次，不能有氣泡，收集上清，剩余組織再消化一次。
(5)4℃1000rpm離心10min，棄上清，加入種植液1重懸，培養(yǎng)箱內(nèi)差速貼壁30min；
(6)收集上清，臺盼藍染色計數(shù)，按6*105cells/孔種入六孔板（種植液1），37℃，5%CO2，95%飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
(7)培養(yǎng)第二天，全換液更換為種植液2；
(8)培養(yǎng)第四天，半量換液加入5uM的，24h全量換液；
(9)之后每周換液兩次。
動物疫病的檢測機構(gòu)結(jié)合制定的動物防疫規(guī)定和標(biāo)準(zhǔn)，并嚴格按照制定的相關(guān)法律法規(guī)、檢驗流程檢驗標(biāo)準(zhǔn)，開展對動物活物、動物產(chǎn)品檢查工作。檢測機構(gòu)針對檢測結(jié)果進行分析，并為動物養(yǎng)殖企業(yè)提供必要的建議和咨詢服務(wù)。通過對檢驗結(jié)果的研究，制定預(yù)防動物疾病的管理措施，制定相關(guān)的動物疫情防控方案。目前在國內(nèi)動物疫病防控領(lǐng)域內(nèi)部，通過開展疫病的檢測，有助于為國內(nèi)的動物養(yǎng)殖業(yè)提供科學(xué)的預(yù)警信息和相關(guān)咨詢服務(wù)，進而推動國內(nèi)的養(yǎng)殖業(yè)給市場和社會公眾提供、無公害的動物農(nóng)產(chǎn)品。
SSC=150mMNaCl,15mM檸檬酸鈉溶液(pH7.4)
HCl處理：對樣本進行20-30min的200mMHCl處理，可將蛋白抽提，并將核酸序列進行一定程度的水解，增加雜交檢測的信噪比。
去垢劑處理：如果對樣品的固定、脫水、包埋等預(yù)處理過程不足以將脂膜成分破壞暴露核酸，可對樣品進行額外的蛋白去垢劑處理(如TritonX-100和SDS)。
蛋白酶處理：樣品中待雜交的核酸序列常與蛋白纏繞交聯(lián)在一起，樣品的固定步驟更是加劇了蛋白的交聯(lián)程度，因此預(yù)滲透是核酸雜交前的常規(guī)步驟，通常通過蛋白酶K的消化作用來完成。根據(jù)不同的文獻來源，蛋白酶K的工作濃度通常設(shè)為10-500μg/ml(溶解于20mMTris-HCl,2mMCaCl2,pH7.4,酶濃度可根據(jù)具體樣品進一步優(yōu)化)，對樣品進行37°C7.5–30min的處理。染色體涂片或核片的蛋白酶K處理濃度可降至1μg/ml消化7.5min。也有文獻指出，固定石蠟包埋的組織切片樣品，使用胃蛋白酶（500μg/ml，溶于200mMHCl）將得到較好的蛋白消化結(jié)果。
肝纖維化動物模型法：
180～200g Wistar或SD大鼠，皮射40%-50%CCl4，油溶液(0.3ml/100g)，每周2次，第2周 始，隔日以20％-30％酒精lml灌胃(或作為飲料)，飼以單純玉米面(混以0.5％膽固醇)，共10周。
評價：第2周出現(xiàn)小葉中心小片狀肝細胞變性壞死， 第4周開始有較薄的纖維間隔形成，第6周間隔進一步增厚，有假小葉形成：第8周形成厚的纖維間隔，分割形成假小葉。大鼠成活率60%-80%。
該模型是目前國內(nèi)外常采用的動物模型，可靠且時間短，肝纖維化進展穩(wěn)定，適合于過程的動態(tài)研究。
（作者： 來源：）
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