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液相色譜法概述
HPLC是在經(jīng)典的液相色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,其以液體作為流動相,并采用顆粒極細的固定相的柱色譜分離技術(shù)。其分離機制與常規(guī)柱色譜相同,但填料更加精細,需高壓泵推動,柱效高,分析速度快。與氣相色譜不同的是液相色譜中流動相亦參與組分的分離過程,其組成、比例和pH值可靈活調(diào)節(jié),分離模式多樣。在實際操
有機酸分析柱采購
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液相色譜法概述
HPLC是在經(jīng)典的液相色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,其以液體作為流動相,并采用顆粒極細的固定相的柱色譜分離技術(shù)。其分離機制與常規(guī)柱色譜相同,但填料更加精細,需高壓泵推動,柱效高,分析速度快。與氣相色譜不同的是液相色譜中流動相亦參與組分的分離過程,其組成、比例和pH值可靈活調(diào)節(jié),分離模式多樣。在實際操作中主要通過改變流動相的組成來調(diào)節(jié)樣品在色譜柱的保留值和選擇性,從而使不同樣品得到分離。
液相色譜法
液相色譜法的應(yīng)用范圍十分廣泛,對樣品的適用性廣,不受分析對象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制,幾乎所有的化合物包括高沸點、極性、離子型化合物和大分子物質(zhì)均可用液相色譜法分析測定,因而彌補了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機化合物中,可用氣相色譜分析的約占20% ,而80% 則需用液相色譜來分析。HPLC因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析和分離高沸點且不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點而被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、及臨床分析,己將該法收載于藥典。
液相色譜
自動進樣器
樣品在進樣前必須經(jīng)過適當?shù)念A(yù)先處理,需要經(jīng)過亞微米濾膜的過濾或者離心,防止樣品中的微小顆粒堵塞管路,好使用流動相作為溶劑配制樣品,所用溶劑應(yīng)該對樣品有較好的溶解性。
針座是喇叭口朝上暴露在空氣中的,有時空氣中的較大灰塵顆粒可能恰好落在針座的流路內(nèi)而引起針座的堵塞。這時候可以嘗試卸下針座,將它接在泵的出口上反沖,一般能解決問題。
如果經(jīng)常使用緩沖溶液,除了泵頭之外,ALS計量泵的柱塞及密封圈,六通閥的轉(zhuǎn)子密封圈和定子密封圈應(yīng)該定期清洗,防止有鹽的顆粒磨損ALS一定要使用Agilent的樣品瓶及瓶蓋;使用不兼容的或者加工精度差的樣品瓶及瓶蓋會引起ALS故障率的增加及性能的降低。
液相色譜柱知識
物理性質(zhì):
柱長,內(nèi)徑,如250*4.6mm。一般柱長在2—250mm,柱越長,分離度越高,但柱壓更高,分離所需時間更長;但分離度與理論塔板數(shù)的平方根成正比,所以一昧增加柱長并不是有效的分離手段,一般情況下,150mm、5um的填料可以提供足夠的塔板數(shù)。
粒徑,影響色譜分離度。粒徑越小,分離越快,柱效越高,但柱壓力越高,柱容易被污染,導(dǎo)致柱壽命降低。常見分析柱通常使用5um填料,復(fù)雜的多組分樣品分離一般使用3.5um粒徑,更大內(nèi)徑的制備色譜柱通常使用更大的粒徑。如果固定相選擇是正確,但是分離度不夠,那么選用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而,3.5um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍,因此如何選擇填料粒徑需要根據(jù)現(xiàn)實情況而定。本文來源于國內(nèi)的第三方檢測平臺嘉峪檢測網(wǎng),提供檢測實驗、技術(shù)培訓(xùn)、儀器計量校準服務(wù)。
孔徑,60A,120A,300A等。孔徑小,則含孔率高,比表面積大,載碳量