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液相色譜法
液相色譜法的應(yīng)用范圍十分廣泛,對樣品的適用性廣,不受分析對象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制,幾乎所有的化合物包括高沸點(diǎn)、極性、離子型化合物和大分子物質(zhì)均可用液相色譜法分析測定,因而彌補(bǔ)了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機(jī)化合物中,可用氣相色譜分析的約占20% ,而80% 則需用液相色譜來分析。HPLC因其
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液相色譜法
液相色譜法的應(yīng)用范圍十分廣泛,對樣品的適用性廣,不受分析對象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制,幾乎所有的化合物包括高沸點(diǎn)、極性、離子型化合物和大分子物質(zhì)均可用液相色譜法分析測定,因而彌補(bǔ)了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機(jī)化合物中,可用氣相色譜分析的約占20% ,而80% 則需用液相色譜來分析。HPLC因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析和分離高沸點(diǎn)且不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、及臨床分析,己將該法收載于藥典。
液相色譜儀常見故障解決方案
如何排除液相色譜儀氣泡溢出的故障?
流動相內(nèi)產(chǎn)生都無法清除不斷產(chǎn)生的氣泡,主要是因?yàn)檫^濾器長期沉浸于銨等緩沖液內(nèi),過濾器內(nèi)部由于霉菌的生長繁殖,形成菌團(tuán),阻塞了過濾器,緩沖液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進(jìn)入流動相。處理過濾器浸泡于5%溶液中,超聲清洗幾分鐘即可;亦可將過濾器浸泡于5%溶液中12~36小時(shí),輕輕震蕩幾次,再將過濾器用純水清洗幾次,打開泄壓閥,打開purge鍵清洗脫氣,如仍有氣泡不斷從過濾器冒出,繼續(xù)將過濾器浸泡于5%溶液中,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團(tuán)已被破壞,流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,打開泵,流速調(diào)至1.0~3.0ml/min,純水沖洗過濾器1小時(shí)左右。即可將過濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥,純沖洗半小時(shí)即可。
液相色譜法可以不做標(biāo)準(zhǔn)曲線嗎?
首先要明確做標(biāo)準(zhǔn)曲線的目的,一般是為了含量測定作為標(biāo)準(zhǔn)品來用。液相色譜的濃度和峰面積成正比,樣品的含量未知,濃度也就未知,峰面積可讀。那么這時(shí)需要一個(gè)已知含量和已知峰面積的對照品。這個(gè)時(shí)候做不做標(biāo)準(zhǔn)曲線要看試驗(yàn)方法,有的方法是外標(biāo)法,也就是和你樣品濃度一樣的對照品,平行配制兩個(gè),進(jìn)樣分析。有的方法是內(nèi)標(biāo)法,就需要樣品中添加內(nèi)標(biāo)物。還有的面積化,那就什么對照都不要進(jìn)了。方法要看你的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),上面應(yīng)該有計(jì)算方法,上面寫的是什么,就按照什么來做。不是非標(biāo)準(zhǔn)曲線不可的。
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