(1)75% (體積分數(shù))酒精消毒孕鼠,在無菌條件下取出胎鼠,分離并切取脊髓,置于冷的無鈣、鎂的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。 (2)解剖顯微鏡無菌條件下仔細剝離脊膜及血管。 (3)用彈簧剪將脊髓剪成1cm3大小，消化液37℃消化15-20min，每五分鐘振蕩一次； (4)去掉上清，加入終止液終止消化，吹打10-15次，不能有氣泡，收集上清，剩余組織再消化
動物尿液檢測


(1)75% (體積分數(shù))酒精消毒孕鼠,在無菌條件下取出胎鼠,分離并切取脊髓,置于冷的無鈣、鎂的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。

(2)解剖顯微鏡無菌條件下仔細剝離脊膜及血管。

(3)用彈簧剪將脊髓剪成1cm3大小，消化液37℃消化15-20min，每五分鐘振蕩一次；

(4)去掉上清，加入終止液終止消化，吹打10-15次，不能有氣泡，收集上清，剩余組織再消化一次。

(5)4℃1000rpm離心10min，棄上清，加入種植液1重懸，培養(yǎng)箱內(nèi)差速貼壁30min；

(6)收集上清，臺盼藍染色計數(shù)，按6*105cells/孔種入六孔板（種植液1），37℃，5%CO2，95%飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

(7)培養(yǎng)第二天，全換液更換為種植液2；

(8)培養(yǎng)第四天，半量換液加入5uM的，24h全量換液；

(9)之后每周換液兩次。




樣品預(yù)處理

　　在待測樣品中，DNA或RNA通常都是被蛋白包裹纏繞，根據(jù)不同的細胞和組織樣品的應(yīng)用，可選擇合適的預(yù)處理方法將靶核酸暴露：

　　內(nèi)源性酶滅活：如果探針的檢測是通過酶促法進行的，則樣品內(nèi)相應(yīng)的內(nèi)源性酶必須被滅活。如內(nèi)源性的POD可通過含1%H2O2的甲醛溶液處理30min。如果檢測酶為AP，可在底物溶液中加入左旋咪唑，AP檢測的內(nèi)源性背景一般來說比POD檢測的低得多，因為在雜交過程中，樣品中內(nèi)源性AP酶的活性基本都喪失了。

　　RNase處理：在DNA-DNA雜交實驗中，RNase的處理可去除內(nèi)源性RNA，增加實驗的信噪比。在進行mRNA為靶標的檢測時，RNase處理的樣品也可作為質(zhì)控對照。通常的處理方式是將DNase-free的RNase溶解于2×SSC(100μg/ml)，樣品在溶液中37℃處理60min。




肝纖維化動物模型化學性損傷法：

雄性Wistar大鼠，體重130g左右，用腹腔內(nèi)注射，次20mg/100g體重，從第二次起12mg/100g體重，每周注射2次，共8周。

評價:第3周，在肝小葉間中間帶出現(xiàn)大片的肝細胞變性壞死和炎細胞浸潤，炎細胞浸潤、壞死細胞數(shù)和程度超過豬模型。6周后出現(xiàn)纖維束，纖維晚于和少于豬模型。大鼠肝纖維組織中有I型膠原的mRNA增多。




肝纖維化動物模型

模型概述：

1. 任何可引起肝損傷的因素長期、反復作用于，均可產(chǎn)生肝細胞變性、壞死，繼而肝和纖維組織，導致肝纖維化。

2. 已有化學性損傷、性、生物學、酒精性和營養(yǎng)性肝纖維化模型。每種方法因致病因素不同，給藥途徑不同，產(chǎn)生的機理、纖維化出現(xiàn)早晚、穩(wěn)定性、出現(xiàn)率、重復性及機體自然患病過程相似程度等都不盡相同。








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