菌落的裂解及DNA結合于纖維素濾膜
(1) 在一張保鮮膜上制作一個裝有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,將濾膜放到小洼上,展平保鮮膜,使濾膜均勻濕潤,讓濾膜留于原處2-3分鐘。
(2) 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜,用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復步驟(1)。
(3) 吸干濾膜,將濾膜轉移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜,再重復一次該步驟。
(4) 吸干濾膜,把它轉移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜,轉移到一張干的濾紙上,置于室溫20-30分鐘,使濾膜干燥。
(5) 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間,在真空烤箱中于80℃干烤2小時,固定DNA。
(6) 將固定在膜上的DNA與32 P標記的RNA進行雜交。
原位雜交技術的應用領域
原位雜交技術在醫學、農業和工業等領域都有廣泛的應用。在醫學方面,原位雜交技術可用于檢測癌細胞、病毒和細菌等致病微生物,幫助醫生制定的診斷和方案。在農業方面,原位雜交技術可用于基因定位、品種鑒定和遺傳育種等領域,提高農作物的產量和。在工業方面,原位雜交技術可用于檢測基因工程產品中的外源DNA,保證產品的安全性和穩定性。
原位雜交技術在其他生物領域也有廣泛的應用,熒光原位雜交,例如:
動物行為學研究:在動物行為學中,原位雜交技術可以用于檢測動物行為與基因表達之間的關系。例如,通過比較不同行為狀態下動物腦組織中基因表達的差異,可以揭示特定基因對動物行為的影響。
生物技術應用:原位雜交技術在生物技術領域也有廣泛應用,例如在基因、基因編輯和開發等方面。例如,通過原位雜交技術可以定位和特定基因,為基因和基因編輯提供基礎數據和工具。
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