藥xiao學(xué)實(shí)驗(yàn)-減肥功能的動(dòng)物試驗(yàn)評(píng)價(jià)方法
1 測(cè)試項(xiàng)目
1.1 原理
這種方法是用高熱量食物誘導(dǎo)動(dòng)物肥胖,然后給試驗(yàn)樣品(肥胖模型),或者同時(shí)給高熱量食物給試驗(yàn)樣品(肥胖預(yù)防模型),觀察其變化動(dòng)物體重和體脂含量。
1.2 肥胖模型法
SPF級(jí)雄性大鼠,體重180-220g,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室,8-12只/組。在屏障系統(tǒng)下,給大鼠喂養(yǎng)維持飼料并觀察5-7天。按體重隨機(jī)分為兩組,10只給予維持飼料作為空白對(duì)照組,可以做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的公司,60只給予高熱量模型飼料。每周記錄喂食量、灑食量、剩食量,稱體重1次。喂養(yǎng)2周后,將給予高熱量飼料的60只大鼠按體重增加進(jìn)行排序,剔除1/3體重增加較低的抗肥胖大鼠。選取40只肥胖敏感大鼠給予高熱量飼料6周,空白對(duì)照組同時(shí)給予維持飼料。

敲低效果驗(yàn)證方法:
RT-PCR
檢測(cè)mRNA,是否仍存在靶 mRNA?或是否敲低成功?
這種方法非常靈敏,但無法準(zhǔn)確預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)水平。
蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)
使用抗ti來檢測(cè)樣品中的靶蛋白表達(dá)以及多種相關(guān)蛋白質(zhì)表達(dá),從而觀察靶蛋白敲除對(duì)其它蛋白質(zhì)的影響。
免yi細(xì)胞化學(xué)法
可檢測(cè)是否存在敲低蛋白。
其優(yōu)勢(shì)在于利用雙重染色法,可同時(shí)檢查敲除對(duì)其它蛋白質(zhì)表達(dá)的影響以及其它蛋白質(zhì)在細(xì)胞中的位置。

五、注意事項(xiàng)
1. 小宮設(shè)備和實(shí)驗(yàn)程序與大鼠類似,但迷宮規(guī)格應(yīng)比大宮小,以免增加小鼠行為操作難度。
2. 本實(shí)驗(yàn)也可只用來測(cè)定工作記憶。方法中不同的是,在所有臂均放置食粒,而不是只選4個(gè)臂放置食粒。
3. 慢性應(yīng)激對(duì)動(dòng)物的迷宮操作可產(chǎn)生影響,且存在性別差異。經(jīng)過慢性應(yīng)激以后,雄性大鼠記憶力減弱,河北動(dòng)物實(shí)驗(yàn),表現(xiàn)為記憶錯(cuò)誤頻率增加;雄性大鼠的空間記憶反而增強(qiáng),表現(xiàn)為錯(cuò)誤頻率減少。
4. 即使在限制進(jìn)食條件下,也應(yīng)讓大鼠體重每周增加5g,以免動(dòng)物因營(yíng)養(yǎng)不良而患病。剔除身體狀態(tài)不良的動(dòng)物。
5. 迷宮周圍的任何一件物品均可被動(dòng)物用來作為空間定為的標(biāo)志。去除或移動(dòng)這些標(biāo)志可能使動(dòng)物操作困難并降低迷宮臂選擇的準(zhǔn)確性。
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